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閆新華

作者:    來源:    發布時間:2014/6/10 16:07:29

     閆新華研究員——毛皮動物疾病控制專家

     中國農業科學院左家特產研究所研究員

     著名毛皮動物疾病防治專家

     作品介紹:

     1、<<水貂腸炎病毒高免卵黃抗體的制備及應用>>

      水貂腸炎病毒高免卵黃抗體的制備及應用

      閆新華 閆喜軍 趙傳芳 王長鳳 吳威 肖長靈

   摘要 用水貂腸炎病毒免疫蛋雞制備卵黃抗體,結果表明,經5次免 疫制備的卵黃抗體,于最后一次免疫第10天AGP效價達132;第30天效價為18。該抗體較 穩定,4℃保存120天、-20℃保存180天效價不變。用該抗體治療細小病毒腸炎病犬,治愈率 達93.9%,證實用水貂腸炎病毒制備卵黃抗體是成功的,可用于犬細小病毒腸炎的治療。

      關鍵詞 水貂腸炎病毒; 卵黃抗體; 病犬; 治療

      中圖分類號 S858.9;S852.43;文獻標識碼 B 文章編號1008-0589(2000)04-0306-02

        Preparation and Application of High Immune Yolk Antibody against Mink Enteritis Virus

        YAN Xinhua,YAN Xijun,ZHAO Chuanfang,WANG Changfeng,WU Wei,XIAO Changling

       (Speciality Institute of CAAS,Jilin 132109)

  Abstract Lay eggs chicken were immunized with mink Enteri ti s Virus to prepare Yolk antibody,The result shows that yolk antibody titer of AG P is 132 at 10th day after of last one immunity of 5 times immunity and titer is 18 at 30thd.The antibody is stable,titer is not change at 4℃120d and -20℃ 180d storage.Parvovirus infected ill dogs were cured with the antibody,Cu re rate is 93.9%,It confirmed that prepared yolk antibody with mink Enteritis Vi rus is successful.It may be used to cure dog Parvovirus enteritis.

      Key words Mink enteritis virus; Yolk antibody; Ill dog;  Cure

   應用產蛋雞制備雞源高免卵黃抗體用于發病雞治療效果十分顯著[1~4 ],抗體效價高,也較穩定,制造成本低,可大批量生產。用豬大腸桿菌異源動物病原制 備卵黃抗體[5]也證實對仔豬黃白痢有較理想的防治效果,抗體使用安全,對仔豬 不產生任何副作用。

       本試驗以水貂腸炎病毒(Mink Enteritis Virus,MEV)作為免疫原對蛋雞進行免疫制備卵黃抗 體,旨在用于發生病毒性腸炎的病犬治療。

       1 材料和方法

       1.1 免疫原 用貓泛白細胞減少癥病毒(FPV)同步感染貓腎傳代細胞,培養 4~5天出現明顯的細胞病變時,用膠刷刮下細胞,離心去掉上清,收集感染細胞,再超聲裂 解細胞,使病毒充分釋放,然后離心收集上清,即為試驗用抗原。

       1.2 試驗用雞 由中國農業科學院特產研究所養犬基地提供的產蛋雞

       1.3 佐劑免疫原制備 水相:病毒抗原96份,吐溫-85 4份;油相:白油90 份,司盤-85 10份,按11將水相緩慢加入油相中,用乳缽研磨,使水相完全包入油相中,最后體積仍為油相體積。

       1.4 免疫方法 總計免疫5次,劑量分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5m l, 每次間隔7日,胸肌多點注射,最后一次免疫7天翅靜脈采血分離血清,當血清AGP效價達1 32時,收集蛋并監測其效價,直至AGP效價在18以下時停止收集。

       1.5 卵黃抗體的提取 將蛋用2%的碘酊在一端消毒,揭開蛋殼0.5cm2, 傾出卵黃,加入等量的滅菌生理鹽水中,攪拌均勻后加入2倍量的三氯甲烷,充分振蕩后放 置過夜,3000r/min離心20分鐘,上清即為卵黃抗體,AGP效價為116(20天采集的卵混合后 平均效價),按總量加0.5%的石碳酸,無菌分裝,分別放4℃保存和-20℃凍存。

       1.6 卵黃抗體對發病犬治療試驗 對某養犬場臨床和實驗室確診為細 小病毒腸炎感染的33只離乳仔犬用制備的卵黃抗體進行治療,評價臨床效果。

       2 結 果

       2.1 免疫雞狀態 蛋雞免疫后體溫、食欲均正常,接種部位無腫脹和硬結 ,吸收良好,與對照群相比,在免疫期間產蛋率下降3%。

       2.2 血清抗體和卵黃抗體效價比較 通過對免疫雞血清抗體和卵黃抗體檢 測比較,證實前者比后者抗體始終高一個稀釋度。

       2.3 卵黃抗體持續的時間 當最后一次免疫第10天時,AGP測定卵黃抗體效 價為132,即開始收集卵,通過抗體監測,直到從收集卵之日起到第8天時下降到116; 到第20天時卵黃抗體下降到18;第24天時下降到14。

       2.4 提取的卵黃抗體特性 用三氯甲烷提取的卵黃抗體清澈透明,加入防 腐劑后長時間放置不出現沉淀和絮狀物,每個雞卵平均可提取15ml,提取后的卵黃抗體效價 與未提取前用滅菌生理鹽水11稀釋的卵黃液抗體效價一致。

       2.5 卵黃抗體的穩定性 將4℃和-20℃保存不同時間的卵黃抗體進行測定 ,結果見表1。

      表1 兩種條件不同時間保存的卵黃抗體效價

       Table 1 Titers of yolk antibody stored at 4℃ and-20℃

        保存條件

Storage condition 保存日期(天)及其效價

Storage date (day)and titer 

0 30 60 90 120 180 210 240 300 360[)〗 

4℃ 132 132 132 132 1 32 116 18 14 14 14 

-20℃ 132 132 132 132 132 132 116  116 18 18

        2.6 卵黃抗體對細小病毒腸炎感染犬治療效果 用卵黃抗 體對33只患細小病毒腸炎離乳仔犬的臨床治療,效果十分理想,治愈31只,治愈率為93.9 %,病犬注射卵黃抗體后無不良反應,詳見表2。

        表2 卵黃抗體對病犬的治療效果

        Table 2 Cure effect of yolk antibody for ill dogs

        病犬數(只)

        Ill dog

        numbers 卵黃抗體

        每次用量(ml)

        E.doses of

        yolk antibo dy 抗體

        效價

        Antibody

        titer 使用抗體兩次

        間隔時間(天)

       Two tim es interval

       of user antibody 治愈數(只)

       一次 二次 三次

       Cure numbers(single )

       once twice three 未治愈數(只)

       Not be cure

       numbers(single) 總治愈率(%)

       Total cure(rate) 

       33 5 116 3 9  13  9 2 93.9

       3 討 論

       以水貂腸炎病毒免疫蛋雞制備的卵黃抗體于最后一次免疫第10天抗體AGP效價達132,持續 8天下降到116,第20天下降到18,證實用異源動物病毒免疫蛋雞也可產生較穩定的高效 價卵黃抗體。

       制備的抗水貂腸炎病毒卵黃抗體于4℃保存120天、-20℃保存180天效價不變,而于4℃保存2 10天、-20℃保存300天,其AGP效價為18,仍可用于發病犬的治療。

用制備的卵黃抗體對發病犬治療,治愈率為93.9%,證實該卵黃抗體具有較理想的特異治療 作用。

      目前,抗犬細小病毒腸炎血清多用健康犬免疫制備,不僅成本高,而且反復捕捉犬也較困難 ,增加了試驗的難度,用蛋雞制備卵黃抗體簡便,制造成本低,每只免疫雞平均可收集20枚 蛋,提取300ml卵黃抗體,而且在免疫期間基本不影響產蛋率,是大批生產異源動物抗體的 一個可行途徑。

      閆新華(中國農業科學院特產研究所,吉林 132109)

      閆喜軍(中國農業科學院特產研究所,吉林 132109)

      趙傳芳(中國農業科學院特產研究所,吉林 132109)

      王長鳳(中國農業科學院特產研究所,吉林 132109)

      吳威(中國農業科學院特產研究所,吉林 132109)

      肖長靈(大慶市杜爾伯特蒙古族自治縣 獸醫衛生防疫站,泰康 166200)

      參考文獻

    [1] 申胤生,張志診,黃明榮.中國家禽,1995,(4):12.

    [2] 李景水,張國玲.中國獸醫科技,1997,27 (8):24.

    [3] 張歧蜀,胡子信,門常平.北京農學院學報,1994,9 (2):110~113.

    [4] 由善智,崔衛東,李洪斌.黑龍江畜牧獸醫,1995,(10):5~8.

    [5] 胡子信,袁新,張歧蜀.中國畜禽傳染病,1994,(2):26~28.

       2、〈〈我國珍貴毛皮動物疾病流行特點及防治中存在的問題〉〉

我國毛皮動物的養殖發展迅速,規模化、密集化飼養程度越來越高,隨之而帶來的環境微生物生態平衡受到破壞,有害微生物增多,病原的污染面加大,導致疫病流行的種類有日益增多趨勢。每年由于多種復雜疫情的發生導致的死亡數平均可達10 % ~ 20 %之間。這是當前毛皮動物養殖的一大障礙,也是生產效益低的一個重要因素。

      1 流行特點

      1 . 1 由于動物宿主與病原體長期受到諸如免疫接種、應激反應、環境因素、飼養方式、免疫缺陷、免疫不應答、個體健康狀態、化學藥物等的影響,導致某些疫病的流行特點、臨床癥狀發生變化,表現流行緩慢,不典型亞臨床病例增多或呈散發形式流行。如犬瘟熱、細小病毒性腸炎、狐貍腦炎、水貂阿留申病、水貂克雷伯氏菌病、流行性感冒、水貂的流行性腹瀉、仔獸的大腸桿菌感染、皮膚疥螨病、附紅細胞體病等。

     1 . 2 病原毒力或抗原型出現新的變化。有些疫病病原毒力表現增強,出現了強毒或超強毒株,雖然已進行了免疫接種,但仍未能獲得保護或保護力低,出現免疫失敗現象,這種情況幾乎每年都有,通過大劑量緊急接種結合使用能激活免疫系統的免疫增強劑才能控制住。

      1 . 3 新發生的疫病種類增多,近幾年,毛皮動物流行很多新病,如附紅細胞體病、化膿性子宮內膜炎、支原體感染、皮膚真菌病、水貂的流行性腹瀉、貉大爪病等,這無疑給該項養殖和防治帶來了新的問題。

      1 . 4 混合感染病例增多,病情復雜,危害程度加大,特別是一些條件性、環境性病原微生物所致疾病有所增加,如大腸桿菌病,綠膿桿菌感染,克雷伯氏菌病,葡萄球菌感染,皮膚疥螨和真菌病等.往往很多病毒性疫病一般都伴有條件性細菌合并感染,使病勢加重,死亡率增高,這給診斷和防治帶來更大的困難.

      1 . 5 細菌性疾病和外寄生蟲病危害日益嚴重,尤其是皮膚疥螨幾乎在全國范圍內廣泛流行,不僅增加了治療費用,而且嚴重影響毛皮質量。

      1 . 6 時常出現不明原因的猝死、臨床和病理檢驗可見有心源性的、腦源性的、肝源性的、脾源性的、肺源性的及腎源性的,即動物死亡后,上述某一器官發生極顯著的病理變化,但都檢測不到病原微生物,目前,對毛皮動物的猝死問題還缺乏明確的診斷依據。

      2 防治中存在的問題

      2 . 1 不注重飼料、飲水、環境衛生及提高健康狀況,把希望全寄托于好的疫苗和藥物上,這是疫病流行和泛濫的一個重要因素,特別是條件性病原微生物的侵染,與獸場的衛生有直接關系,疥螨的發生與溫度、濕度、光照、通風、衛生等環境因素密切相關。

      2 . 2 抗菌素的濫用或劑量、療程不足,過度依賴抗菌素,在飼料中長期添加化學藥物,導致耐藥菌株的產生,出現抗藥性和二重感染,結果導致越治越重的局面。

      2 . 3 疫病診斷技術落后,缺乏對某些疾病快速準確診斷方法,這是導致疫情蔓延和錯過治療機會的一個重要原因.

      2 . 4 糞便蓄積,不及時清除,特別是在夏秋季節,糞便發酵,惡臭,產生大量的氨,刺激上呼吸道,支氣管肺炎感染病例增多,獸場不驅蠅,蒼蠅鋪天蓋地,極易傳播疾病。

      2 . 5 隨意解剖尸體,沒有防護措施,剖檢過的尸體不進行深埋或焚燒處理,到處亂扔,造成環境污染,病原擴散。 

      2 . 6 對藥物的性能和配伍禁忌缺乏了解,結果造成藥物失效或藥效降低,如青霉素與維生素 Bl 、維生素 C 合用可破壞青霉素的功效;青霉素與慶大霉素合用可降低療效:頭孢菌素類和青霉素均不能與酸性(如維生素 C)或堿性(如碳酸氫鈉)藥物配伍;青霉素與黃連素配伍可產生沉淀反應;氯霉素不能與青霉素、氨節青霉素及磺胺類配伍:地塞米松不能用于病毒性疾病感染的治療等,這些都是必須了解的用藥常識,應引起重視。否則,臨床上就會出現治療效果不佳或越治越重的結果。

       綜上所述,我國毛皮動物疫病的防治還仍然存在很多問題急待解決,從事此方面工作的科技工作者應不斷探索,特別是在疫病的快速準確診斷及新的高效疫苗和藥物的開發、病原的自然變異、疫病的流行病學和分子流行病學及發病機制、環境衛生和環境生態保護方面應加大力度研究,以推動我國毛皮動物的健康養殖,獲得更高的經濟、社會和生態效益。

     3、〈〈毛皮動物消化、呼吸、泌尿系統疾病及腦炎常用藥物問答〉〉:

     1  治療毛皮動物消化系統疾病常用藥物有哪些?

     治療毛皮動物消化系統常用藥物有:1、抗菌消炎藥:慶大霉素、卡納霉素、氯霉素、黃連素、諾氟沙星、環丙沙星、磷霉素、土霉素、磺胺脒、痢特靈、穿心蓮等。2、助消化藥:VB1、乳酶生、胃蛋白酶等。3、收斂止瀉藥:藥用炭、鞣酸蛋白、次硝酸鉍等。4、消化道止血藥:止血敏、仙鶴草索、VK3等。5、制酵藥:魚石脂、大蒜酊。6、消沫藥:松節油、植物油。7、止吐藥:胃復安、胃得靈、嘔必停、愛茂爾、VB6、阿托品、氯丙嗪等。8、驅蟲藥:伊維菌素、通滅、凈滅、左旋咪唑、驅蛔靈、腸蟲清等。

      2  治療毛皮動物呼吸系統疾病常用藥物有哪些?

      治療毛皮動物呼吸系統疾病常用抗菌藥物有:青霉素、紅霉素、慶大霉素、氨芐青霉素、麥迪霉素、乳酸環丙沙星、鏈霉素、氧氟沙星、氟苯尼考、復方新諾明、磺胺嘧啶、板藍根、大青葉等。

      3  治療毛皮動物泌尿系統疾病常用藥物有哪些?    

      治療毛皮動物泌尿系統疾病常用藥物有:青霉素、慶大霉素、阿莫西林、復方新諾明、諾氟沙星、環丙沙星、氧氟沙星、小諾霉素、磷霉素等。

      4  治療毛皮動物腦炎一般都選用哪些藥物?

      治療腦炎常用藥物:磺胺嘧啶鈉、氯霉素、青霉素、氨芐青霉素、氯丙嗪、硫酸鎂、甘露醇等。

      4、〈〈狐貉犬瘟熱,細小病毒性腸炎和腦(肝)炎流行病學調查〉〉

      摘  要:

      以現場查詢病原,分離鑒定,病理學研究,免疫學診斷為基礎,對1994~1998年我國15個省主要毛皮獸場狐、貉、犬瘟熱、病毒性腸炎和腦(肝)炎進行調查。結果表明,狐、貉三大疫病在我國仍在繼續流行,總體流行規律與年齡、性別、品種、飼養管理、飼養密度及應激有直接關系,調查結果證實三大疫病的流行,犬瘟熱發生的頻率最高,居主導地位;其次是細小病毒性腸炎和腺病毒腦(肝)炎。

      5、〈〈北極狐嗜水氣單胞菌的分離與鑒定〉〉

      趙傳芳,閆新華,王長鳳,萇群紅 

   從北極狐臟器中分離到一種革蘭氏陰性桿菌 ,經培養特征、形態、生理生化、致病力測定及藥敏試驗證實為嗜水氣單胞菌 ,確定該菌為引起狐致死的病原菌

    【作者單位】:中國農業科學院特產研究所 吉林吉林132109 (趙傳芳;閆新華;王長鳳);中國農業科學院特產研究所 吉林吉林132109(萇群紅)

    【關鍵詞】:北極狐;嗜水氣單胞菌;分離鑒定

    【分類號】:S858.92

    【DOI】:cnki:ISSN:1007-7448.0.2002-04-007

    【正文快照】:

      嗜水氣單胞菌 [Aeromonashydrophila(chester)Staniev]為氣單胞菌屬的模式種 ,廣泛存在于淡水、海水、土壤中及魚類等脊椎動物的腸道中。近年來 ,由本菌引起的腹瀉及其他感染的報道日益增多 ,但感染狐的報道甚少。 2 0 0 1年 9月 2 5日 ,遼寧省某養狐場飼養的 2 0 0只北極狐中 ,有 1 0只突然發病 ,2只死亡。病狐精神沉郁 ,食欲減退或廢絕 ,嘔吐 ,隨后開始發生水樣腹瀉 ,最后排血便。剖檢 2只死亡狐 ,其主要病變為肝腫大 ,質脆 ,肺臟出血 ,腸道粘膜出血 ,經實驗室檢查和動物感染試驗證實了嗜水氣單胞菌是引…

       6、〈〈我國毛皮動物疫病流行特點及防治中存在的問題〉〉

       中國農業科學院特產研究所   閆新華

       我國毛皮動物養殖業發展迅速,規模化、密集化飼養程度越來越高,隨之而來的環境微生物生態平衡受到破壞,有害微生物增多,導

致流行疫病的種類日趨增多。每年由于多種疑難病癥導致的死亡率平均可達10%~20%。這是當前毛皮動物養殖的一大障礙,也是生產效益低的一個重要因素。

      1、毛皮動物疫病流行特點

     (1)某些疫病流行特點和臨床癥狀發生變化 由于動物宿主與病原體長期受到諸如免疫接種、應激反應、環境因素、飼養方式、免疫缺陷、免疫不應答、個體健康狀態及化學藥物等的影響,導致某些疫病的流行特點、臨床癥狀發生變化。例如犬瘟熱、細小病毒性腸炎、狐貍腦炎、水貂阿留申病、水貂克雷伯氏菌病、流行性感冒、水貂的流行性腹瀉、仔獸的大腸桿菌感染、皮膚疥螨病、附紅細胞體病、兔瘟、兔魏氏梭菌病等。

    (2)病原毒力或抗原型出現新的變化 有些病原毒力增強,出現了強毒或超強毒株。雖然已進行了免疫接種,但仍未能獲得保護或保護力低而出現免疫失敗的現象,這種情況幾乎每年都有。通過大劑量緊急接種疫苗、結合使用能激活免疫系統的免疫增強劑才能控制疫情蔓延。

    (3)新發現的疫病種類增多 近幾年,毛皮動物流行很多新病,如附紅細胞體病、化膿性子宮內膜炎、支原體感染、皮膚真菌病、水貂的流行性腹瀉、貉大爪癥等,這無疑給養殖和防治帶來了新的問題。

    (4)病情復雜、危害程度加大 混合感染病例增多,特別是一些條件性、環境性病原微生物所致的疾病有所增加。例如大腸桿菌病、綠膿桿菌感染、克雷伯氏菌病、葡萄球菌感染、兔的巴氏桿菌和魏氏梭菌感染、皮膚疥螨和真菌病等。往往很多病毒性疫病一般都伴有條件性細菌合并感染,給診斷和防治帶采了更大的困難。

    (5)細菌性疾病的外寄生蟲病危害日趨嚴重 尤其是皮膚疥螨,幾乎在全國范圍內廣泛流行,不僅影響動物生長發育和增加了治療費用,而且嚴重地影響了毛皮質量。

    (6)時常出現不明原因的猝死 臨床和病理檢驗可見有心源性的、腦源性的、肝源性的、脾源性的、肺源性的及腎源性的猝死,即動物死亡后,上述某一器官發生極顯著地病理變化,但都檢測不到病原微生物。目前,對毛皮動物的猝死問題還缺乏明確的診斷依據。

      2、毛皮動物疫病防治中存在的問題

    (1)飼養管理不當 不注重飼料、飲水、環境衛生及提高健康狀況,只把希望寄托于好的疫苗和藥物上,這是疫病流行和泛濫的一個重要因素。特別是條件性病原微生物的侵染,與獸場環境及籠舍的衛生有直接關系,例如疥螨的發生與溫度、濕度、光照、通風、衛生等環境因素密切相關。

    (2)濫用抗菌素和化學藥物 濫用抗菌素或劑量、療程不足,過度依賴抗菌素,在飼料中長期添加化學藥物,導致耐藥菌株的產生,出現抗藥性和二重感染,結果導致越治越重的局面。

    (3)診斷不利 疫病診斷技術落后,缺乏對多種疫病快速、準確診斷的方法,這是導致疫情蔓延和錯過治療機會的一個重要原因。

    (4)環境衛生不良 糞便堆積,不及時清除,特別是在夏、秋季節,糞便發酵產生大量的氨,刺激上呼吸道,致使動物支氣管肺炎感染病例增多。獸場不滅蠅,極易傳播疾病。

    (5)尸體解剖操作不規范 隨意解剖尸體,沒有防護措施;剖檢過的尸體不進行深埋或焚燒處理,到處亂扔,造成環境污染、病原擴散。

    (6)缺乏用藥知識 對藥物的性能和配伍禁忌缺乏了解,結果造成藥物失效或藥效降低。如青霉素與VB1、Vc合用可破壞青霉素的功效;青霉素與慶大霉素合用可降低療效;頭孢菌素類和青霉素均不能與酸性(如Vc)或堿性(如碳酸氫鈉)藥物配伍;青霉素與黃連素配伍可產生沉淀反應;氯霉素不能與青霉素、氨芐青霉素及磺胺類配伍;地塞米松不能用于病毒性疾病感染的治療等。這些都是必須了解的用藥常識,應引起重視,否則,臨床上就會出現治療效果不佳或越治越重的結果。

     綜上所述,我國毛皮動物疫病的防治存在很多亟待解決的問題,從事此方面工作的科技工作者應不斷探索,特別是在疫病的快速準確診斷、新的高效疫苗和藥物的開發、病原的自然變異、疫病的流行病學和分子流行病學及發病機制、環境衛生和環境生態保護方面,應加大研究力度,以推動我國毛皮動物的健康養殖,獲得更高的經濟、社會與生態效益。


 

 

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